Tkissir tal-barriera orali（3）

L-iskoperta, l-ottimizzazzjoni, u l-modifika sussegwenti ta’ PN-235 (icotrokinra, JN-2113)

Il-vantaġġi ta 'peptidi ċikliċi amministrati oralment ġew dettaljati f'artikoli preċedenti, b'PN-235 jirċievi attenzjoni sinifikanti bħala waħda mill-ftit mediċini ċikliċi peptidi disponibbli bħalissa għall-amministrazzjoni orali. Fil-21 ta 'Lulju, 2025, Protagonist u Janssen ħabbru li kienu ssottomettew Applikazzjoni għal Droga Ġdida (NDA) lill-FDA għal Icotrokinra, għat-trattament ta' psorjasi tal-plakka minn moderata għal severa f'adulti u tfal ta' 12-il sena 'l fuq. Jekk approvat, Icotrokinra huwa mistenni li jsir l-ewwel mediċina orali fid-dinja li timmira lil IL-23R għat-trattament tal-psorjasi. Dan l-artikolu jiffoka fuq il-proċess ta 'skoperta u strateġiji ta' ottimizzazzjoni sistematika ta 'din il-molekula, billi juża d-dati tal-pubblikazzjoni tal-privattivi bħala skeda ta' żmien, u jiġbor fil-qosor ukoll direzzjonijiet potenzjali għal aktar ottimizzazzjoni.

Sa mill-2007, Valorisation Hsj, Societe En Commandite ressqet applikazzjoni għal privattiva għall-antagonisti tal-peptidi IL-23R (WO2009007849). Din hija waħda mill-ewwel privattivi li jinvolvu antagonisti tal-peptidi IL-23R fl-informazzjoni disponibbli pubblikament. Din il-privattiva tiddeskrivi serje ta 'peptidi li jimmiraw lejn IL-23R, inklużi l-agonist APG-2301 u l-antagonisti APG-2303, APG-2305, APG-2307, u APG-2309 (sekwenzi murija fil-figura hawn taħt). It-tim uża s-sekwenza ta 'aċidu amminiku ta' IL-23R bħala bażi, flimkien ma 'tekniki ta' mmudellar bil-kompjuter, biex jiġġenera peptidi lineari li jikkorrispondu mar-reġjun taċ-ċappetta tiegħu (li jimitaw IL-23 u jaġixxu bħala antagonisti ta 'IL-23R). Fost dawn, APG-2305 u APG-2309 inibixxu b'mod effettiv il-fosforilazzjoni ta 'STAT3 fi splenoċiti tal-ġrieden in vitro, b'valuri IC50 ta' 1 nM u 2 nM, rispettivament. Barra minn hekk, f'mudell IBD tal-firien, it-trattament b'APG-2309 ttaffi b'mod sinifikanti l-edema u l-ħmura kkawżati mill-infjammazzjoni, u naqqas b'mod sinifikanti l-infiltrazzjoni tal-lewkoċiti mukożi u l-konġestjoni vaskulari, u wera potenzjal tajjeb anti-infjammatorju u terapewtiku.

Fl-2013, il-Laboratorji Dijanjostiċi Mediċi (MDL) ippubblikaw privattiva (US20130029907) li tiddeskrivi l-iskoperta ta 'peptidi li jorbtu IL-23R{-bl-użu tat-teknoloġija tal-wiri tal-fagi, li jidentifikaw b'suċċess diversi sekwenzi ta' peptidi li jingħaqdu speċifikament mal-IL-23R. Din ir-riċerka bniet librerija tal-wiri tal-fagi M13 li fiha sekwenzi każwali ta' peptidi 12-mer u wettqet rawnds multipli ta' screening bl-użu ta' IL-23R rikombinanti solubbli fit-tul sħiħ u l-varjanti ta' splice tiegħu bħala miri. Fl-aħħar mill-aħħar, ġew identifikati 27 peptide b'attività li torbot. Notevolment, dawn is-sekwenzi tal-peptidi wrew xebh baxx mal-istruttura tal-kristall IL-23 irrappurtata minn Beyer et al. (PDB ID: 3D85). Permezz ta 'l-allinjament tas-sekwenza, ir-riċerkaturi sabu li 66.7% tal-peptidi kien fihom sekwenza ta' rikonoxximent konservata: -WX1X2X3W-, li kienet ipotizzata li tkun motif funzjonali ewlieni għall-irbit ma 'IL-23R u jimblokka t-transduction tas-sinjal downstream tagħha (sekwenza rappreżentattiva hija murija fil-figura hawn taħt). Sussegwentement, ir-riċerkaturi evalwaw l-attività inibitorja tal-peptidi fuq IL-23 li torbot ma 'IL-23R bl-użu ta' esperimenti ELISA kompetittivi, u identifikaw Peptide 23 (peptide 12-mer) bħala l-aktar peptide attiv, li inibixxi b'mod sinifikanti l-irbit ta 'IL-23 ma' IL-23R (IC50=0.85 µM).

Abbażi ta 'dan, it-tim ottimizzat l-istruttura ta' Peptide 23, inkluż l-estensjoni jew it-tqassir tat-termini C/N, is-sostituzzjoni ta 'aċidi amminiċi interni b'aċidi amminiċi aċidużi / newtrali / bażiċi, u modifiki ta' ċiklizzazzjoni. Ir-riżultati ELISA kompetittivi wrew li l-estensjoni tal-aċidi amminiċi fiż-żewġt itruf tal-Peptide 23 kellha ftit effett fuq l-attività inibitorja tagħha, iżda t-tqassir wassal għal tnaqqis fl-attività inibitorja. Il-modifika tal-proprjetajiet ta 'ċarġ tar-residwi "X" fil-motiv tal-qalba -WX1X2X3W- (eż., is-sostituzzjoni ta' residwi kkargati b'mod negattiv b'residwi oħra kkargati negattivament, polari mhux iċċarġjati, jew iċċarġjati b'mod pożittiv) ma affettwax b'mod sinifikanti l-attività inibitorja tagħha, li jindika li l-karatteristiċi ta 'ċarġ tar-residwi ta' l-attività ta 'rbit mhumiex determinanti ewlenin f'dan ir-reġjun. Is-sostituzzjoni ta 'wieħed mir-residwi ta' tryptophan (W) fl-istruttura tal-qalba b'phenylalanine (F) jew tyrosine (Y) żammet il-kapaċità inibitorja tagħha, filwaqt li tibdilha b'alanine (A) naqqset l-attività, li hija konsistenti mal-karatteristiċi tas-sekwenza miksuba mill-iskrinjar tal-wiri tal-fagi preċedenti.

Barra minn hekk, it-tqassir tal-Peptide 23.15 filwaqt li żamm l-istruttura tal-qalba -WQDYW{-, għalkemm il-motif tal-qalba kien ippreservat, dgħajjef b'mod sinifikanti l-attività inibitorja tiegħu. Barra minn hekk, l-introduzzjoni ta 'cysteine ​​(Cys) fiż-żewġt itruf biex tifforma peptide ċikliku rriżultat f'attività komparabbli mal-peptide lineari; madankollu, it-tnaqqis tad-daqs tal-peptide ċikliku għal 7 jew 9 peptidi filwaqt li tinżamm l-istruttura tal-qalba dgħajjef b'mod sinifikanti l-abbiltà tiegħu li jinibixxi IL-23R.

F'żewġ privattivi sussegwenti ppubblikati minn MDL (US20130172272 u US20160039878), ir-riċerkaturi użaw l-istruttura tal-qalba -WX1X2X3W{- bħala scaffold u bnew u skrinjaw librerija ta' peptidi mmirati bl-użu tat-teknoloġija tal-wiri tar-ribosomi (sekwenza tal-librerija tal-peptidi:XXXXXX). Wara tmien rawnds ta' screening, il-peptidi ġew suddiviżi aktar abbażi tal-istruttura -WX1X2YW-: Grupp A kien fih -WVDYW{-, Grupp B kien fih -WQDYW{-, u Grupp Ċ kien fih peptidi b'sekwenzi ewlenin oħra. It-testijiet tal-attività tal-ELISA wrew li Peptide Nru. 2/7 fi Grupp A kellu attività superjuri meta mqabbel mal-Peptide Nru. 23.19 żvelat fil-privattiva preċedenti. F'testijiet ELISA kompetittivi, Peptide Nru. 7 kellu IC50 ta' 58.0 nM, u Peptide Nru. 2 kellu IC50 ta' 34.6 nM.

Sussegwentement, bl-użu tal-Peptide NO.2 u l-Peptide NO.7 bħala punti tat-tluq, ġew iddisinjati u sintetizzati tliet peptidi ċikliċi: 2HT-AA, 7-CC, u 7HT-AA. Fost dawn, il-molekula 2HT-AA, ibbażata fuq iċ-ċiklizzazzjoni tar-ras-sa-denb tar-residwi tal-alanina fiż-żewġt itruf tal-Peptide NO.2, uriet l-aħjar attività (struttura murija fil-figura hawn taħt), b'ELISA IC50 kompetittiva ta' 8.1 nM u metodu ta' reporter ta' 8.1 nM u attività ta' reporter ta' ILM2{41. stimulat linja taċ-ċelluli DB trasfettata b'ġene reporter STAT3, u l-attività inibitorja ġiet kwantifikata billi skopra l-espressjoni tal-ġene reporter). Dan irrappreżenta żieda ta' 4-6 darbiet fl-attività meta mqabbel mal-peptide lineari. F'testijiet ta 'attività in vitro, 2HT-AA inibixxi b'mod effettiv is-sekrezzjoni ta' IL-17F indotta minn IL-23 fiċ-ċelloli Th17 umani b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni u imblukkat il-produzzjoni ta 'IL-22 f'PBMCs umani u splenocytes tal-firien. Fl-istess ħin, dan il-peptide ċikliku rregola wkoll il-livelli ta 'l-mRNA ta' IL-17F fl-isplenoċiti tal-firien. Sfortunatament, minkejja l-attività farmakoloġika promettenti ta '2HT-AA, ma nstabu l-ebda rapporti ta' ottimizzazzjoni sussegwenti ta 'din l-istruttura tal-peptide ċikliku u d-derivattivi tagħha minn MDL.